随着抗体研发技术进步，特别是人源化小鼠和噬菌体/酵母库方法的出现，可以开发出大量不同类型的抗体样品，为了能够快速筛选出具有可开发研究性能的样品，对于快速、高效制备高纯度样品提出更高要求。

　　比较正规的足球外围app客户礼来（Eli Lilly and Company）在《MABS》杂志发表题为《Development of a robust and semi-automated two-step antibody purification process》文章，文中采用亲和层析及体积排阻制备柱 SRT-10C SEC-300建立快速、高效获取高纯度抗体的方法，同步解决内毒素清除问题，大大提升纯化效率，有利于快速推进实验进程。

背景介绍

　　抗体研发技术壁垒逐渐被打破，针对同一靶点可以开发成百上千的抗体分子，对于该分子能否成药需要制备一定量的样品进行快速筛选，用以评估其可开发性（developability）以及工艺可行性（manufacturability）。此前，采用孔板纯化（plate-based purification）的方式不能够提供足够量的高纯度抗体样品支持后续研究。因此，需要开发快速制备一定量高纯度样品的方法，样品量约为10-100 mg称为“mid-scale”，可足够用于细胞基质实验、体内药效实验以及生物物理性质研究等，初步筛选出目标分子。

文章概述

　　文章报告了一种抗体的高效纯化方式，采用Protein A亲和捕获联合体积排阻精制的纯化流程制备高纯度抗体样品。体积排阻分离选择琼脂糖基质Superdex 200及硅胶基质的SRT-10C SEC-300两款产品进行对比分析，根据产品特性，选择合适的流速条件进行实验，得到结果（表1）显示比较正规的足球外围appSRT-10C SEC-300具有较高的分离度，精制的抗体样品具有更高的收率和相当的纯度，流速可达7.5 mL/min，且具有更快的分离速度，很大程度上减少研发时间。因而，第二步抗体精制选择SRT-10C SEC-300制备柱。

表1 SRT-10C SEC-300与Superdex 200纯化效果对比

　　另一方面，在细胞基质实验以及体内研究等要求很低的内毒素含量，因而在纯化过程中需要解决内毒素去除的问题。针对于此，文中提出了解决方案，考察不同浓度的异丙醇（IPA）作为CIP（clean-in-place）溶液对体积排阻精纯过程中内毒素的清除效果。结果（表2）表明采用≥25%异丙醇溶液作为CIP溶液可将内毒素清除95%。为验证该方案的可行性，考察了约350种抗体样品内毒素去除情况，结果显示，其内毒素均值可控制在0.8 EU/mg，97%的样品内毒素控制在3 EU/mg。

表2 不同浓度IPA对抗体样品内毒素清除效果

图1 约350种抗体样品内毒素清除检测结果

　　该文章介绍了完整的抗体纯化方法，采用亲和捕获以及体积排阻两步半自动化的纯化方式，经对比分析，选择SRT-10C SEC-300作为精纯步骤，该方法可在20 h内纯化24~48个抗体样品，每个纯化后的样品可达80 mg，满足高通量筛选需求。同时考察样品内毒素去除情况，保证了样品的质和量。经过验证，该半自动化两步抗体纯化方法可以广泛应用。

延展阅读

　　此前文献速递栏目，介绍SRT-10C体积排阻色谱产品还可应用于纳米抗体的纯化。比较正规的足球外围app长期客户苏黎世大学和Linkster Therapeutics联合在《自然》杂志子刊《Nature Protocols》上发表的文章中提到SRT-10C SEC-100制备柱应用于纳米抗体的纯化，可有效降低色谱峰拖尾问题，提高纯化效果。

　　[1] Xiaomin Yang, Richard Yuan, Christopher Garcia, Jessica Berry, Denisa Foster, Dongmei He, Gui-Feng Zhang & Bryan E. Jones (2021) Development of a robust and semi-automated two-step antibody purification process, mAbs, 13:1, 2000348, DOI:10.1080/19420862.2021.2000348

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