瘦肉精是一类动物用药,有数种药物被称为瘦肉精,例如莱克多巴胺(Ractopamine)及克伦特罗(Clenbuterol)等。
目前,检测瘦肉精的方法主要有四种,即高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、毛细管区带电泳法(CE)和免疫分析技术(IA)。而我国结合自己的实际情况,2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。该标准选择确定了两种:即高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)。而HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法,其最低检测限为0.05μg/ kg,具有检测精确度高,假阳性率低的有点,被广泛使用。
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动物组织中盐酸克伦特罗和莱克多巴胺残留量的检测
实验材料
固相萃取柱:SSDBX, 60 mg/3 mL (SSDBX063)
分析物:盐酸克伦特罗、莱克多巴胺
1.提取
称取(5±0.05)g 动物肝组织样品于带盖的聚四氟乙烯离心管中,加入15 mL乙酸乙酯,再加入3 mL 10.0%碳酸钠溶液,以10 000 r/min以上的速度匀质60 s,盖上盖子以 5000 r/min 的速度离心2 min,吸取上层有机溶剂于离心管中,在 残渣中再加入10 mL 乙酸乙酯在漩涡混合器上混合1 min。离心后吸取有机溶剂并合并提取液。在收集的有机溶剂中加入5 mL 0.10 mol/mL 的盐酸溶液,漩涡混合 30 s,以5000 r/min 的速度离心2 min,吸取下层溶液,同样步骤重复萃取一次,合并两次萃取液,用 2.5 mol/L NaOH 溶液调节 pH 至5.2。
2.净化
活化:依次用 5 mL 甲醇、5 mL 水和5 mL 30 mmol/L 盐酸润洗固相萃取柱
上样:将提取液加入柱中,弃去流出液
淋洗:依次用5 mL水、5 mL甲醇淋洗,淋洗液弃去,并将小柱抽干
洗脱:6 mL 4% 氨化甲醇洗脱,收集洗脱液。
3 测定
4 HPLC分析
色谱柱:Sapphire C18, 5 µm, 100 Å, 4.6×250 mm
流动相:10 mM KH2PO4(pH 3.0) : ACN = 70:30 (v/v)
流速:1.0 mL/min;温度:室温;检测器:UV 220 nm;进样体积:20 µL
1.莱克多巴胺 2. 克伦特罗